Создан лентивирусный вектор для инсерции коммерческого флюорогенного протеазного биосенсора каспазы-3 — ZipGFP-Casp3 — в клеточные культуры. В качестве целевых культур для изучения особенностей апоптоза были выбраны три культуры мезенхимных стволовых клеток (МСК) из печени и плаценты, культура дермальных фибробластов, а также клоны стабильных линий колоректальной карциномы HT-29 и Caco2 с нокаутом главного маркера раковых столовых клеток CD133 и контрольные клоны этих двух линий. Все культуры были трансдуцированы сенсором ZipGFP-Casp3, клетки с прошедшей трансдукцией были отсортированы и в части выведенных культур были отмечены клетки, спонтанно уходящие в апоптоз и демонстрирующие стойкую флюоресценцию GFP. Кроме того, были проведены эксперименты по изучению чувствительности трансдуцированных флюорогенным сенсором каспазы-3 МСК плаценты, а также клона линии HT-29 с нокаутом CD133 и контрольного клона этой линии к классическим индукторам апоптоза — стауроспорину и TRAIL. Полученные результаты позволяют утверждать, что выведенные клеточные культуры являются хорошими моделями для изучения апоптоза в культурах МСК и в популяции раковых стволовых клеток.

A lentiviral vector was created for inserting the commercial fluorogenic protease biosensor for caspase-3, ZipGFP-Casp3, into cell cultures. Three cultures of mesenchymal stem cells (MSCs) from the liver and placenta, a dermal fibroblasts, and colorectal carcinoma clones of HT-29 and Caco2 cell lines with knockout of the main cancer stem cell marker CD133, along with control clones of these lines, were selected as target cultures for studying apoptosis. All cultures were transduced with the ZipGFP-Casp3 sensor. The transduced cells were sorted, and in some derived cultures, cells undergoing spontaneous apoptosis and showing stable GFP fluorescence were noted. Additionally, experiments were conducted to study the sensitivity of transduced placental mesenchymal stem cells, as well as clones of the HT-29 line with CD133 knockout and its control clone, to classical apoptosis inducers — staurosporine and TRAIL. The obtained results confirm that the derived cell cultures serve as good models for studying apoptosis in MSC and in the cancer stem cell population.