Выбор оптимального протокола получения децеллюляризированного внеклеточного матрикса мезенхимных стромальных клеток из ткани пупочного канатика человека
Э.С.Кочетова1,2, Д.К.Матвеева1, А.Э.Мелик-Пашаев1, Е.Р.Андреева1, Ю.А.Романов3,4, Л.Б.Буравкова1 - 235-241
1ГНЦ РФ — Институт медико-биологических проблем РАН, Москва, РФ; 2МГУ им. М.В.Ломоносова, Москва, РФ; 3НМИЦ кардиологии им. акад. Е.И.Чазова Минздрава России, Москва, РФ; 4ООО "Криоцентр", Москва, РФ
Для получения внеклеточного матрикса (ВКМ) из мультипотентных мезенхимных стромальных клеток ткани пупочного канатика (МСК-ТПК) применяли 6 протоколов децеллюляризации, основанных на использовании физических (замораживание/оттаивание) и химических (Triton-X100, CHAPS, SDS, NP-40) методик. Качество децеллюляризации оценивали с помощью фазово-контрастной и флюоресцентной микроскопии, а также морфометрического анализа. Показано, что протоколы на основе CHAPS/NH4OH и Triton X-100/NH4OH оптимальны для децеллюляризации пластов МСК-ТПК и обеспечивают высокое качество ВКМ. Протокол с использованием SDS может быть полезен при наличии специальных требований к структуре матрикса. Полученные данные будут востребованы в разработке биомедицинских продуктов.
Ключевые слова: мультипотентные мезенхимные стромальные клетки (МСК) из пупочного канатика; внеклеточный матрикс (ВКМ); децеллюляризация; микроскопия; анализ изображений
Адрес для корреспонденции: andreeva1564@gmail.com Андреева Е.Р.
DOI: 10.47056/1814-3490-2024-4-235-241
Selection of optimal protocol for decellularization of extracellular matrix of mesenchymal stromal cells of human umbilical cord tissue
E. S. Kochetova1,2, D. K. Matveeva1, A. E. Melik-Pashayev1, E. R. Andreeva1, Yu. A. Romanov3,4, and L. B. Buravkova1
1State Scientific Center of the Russian Federation — Institute of Biomedical Problems of the Russian Academy of Sciences, Moscow, Russia; 2Lomonosov Moscow State University, Moscow, Russia; 3National Medical Research Center of Cardiology named after Academician E. I. Chazov, Moscow, Russia; 4"Cryocenter" LTD, Moscow, Russia
To obtain the extracellular matrix (ECM) from multipotent mesenchymal stromal cells of umbilical cord tissue (UC-MSCs), six decellularization protocols were used, based on physical (freeze/thaw) and chemical (Triton-X100, CHAPS, SDS, NP-40) methods. The quality of decellularization was assessed using phase-contrast and fluorescence microscopy, quantitative image analysis was performed as well. It was shown that protocols based on CHAPS/NH4OH and Triton X-100/NH4OH are optimal for decellularizing UC-MSC layers and provide high-quality ECM. The SDS-based protocol may be useful when certain matrix structure requirements are specified. The presented data will be in demand for the development of biomedical products.
Key Words: multipotent mesenchymal stromal cells (MSCs) from umbilical cord; extracellular matrix (ECM); decellularization; microscopy; image analysis