Разработка, регистрация и дальнейшее применение таргетных препаратов (энтректиниб и ларотректиниб) для лечения опухолей, возникающих в результате онкогенной стимуляции химерными белками рецепторов нейротрофинов (TRK), обусловили повышенный интерес к механизмам формирования резистентности опухолевых клеток к ингибиторам TRK в процессе лечения. На основе фибробластов человека (hFF) создана клеточная линия, несущая химерный ген ETV6-NTRK3 (HFF-EN). Уровень транскрипции химерного гена ETV6-NTRK3 в клетках HFF-EN был сопоставим с уровнем транскрипции гена AСTB, экспрессия белка ETV6-NTRKА подтверждена иммуноблоттингом. Сравнение кривых доза—эффект фибробластов и клеток HFF-EN показало ~38-кратное увеличение чувствительности последних к ларотректинибу. Для получения модели развития устойчивости к ларотректинибу при NTRK-зависимом раке с использованием пассажей линии при постепенно увеличивающейся концентрации ларотректиниба были получены шесть резистентных клонов. В пяти клонах обнаружили мутацию p.G623E c.1868G>A, в одном клоне, демонстрирующем значительно меньшую резистентность, была обнаружена мутация p.R582W c.1744C>T, ранее не описанная как мутация резистентности. Полученные данные могут быть использованы в дальнейших исследованиях для более полного понимания механизмов формирования резистентности к ингибиторам TRK и в разработке новых препаратов.

The development, registration, and further use of entrectinib and larotrectinib for the treatment of tumors resulting from oncogenic stimulation of chimeric neurotrophin receptors (TRK) led to an increase in interest in the mechanisms of tumor cells resistance to TRK inhibitors during treatment. In the presented study, a cell line carrying the chimeric gene ETV6-NTRK3 (HFF-EN) was created by means of human fibroblasts. The transcription level of the chimeric ETV6-NTRK3 gene in HFF-EN was comparable to the transcription level of the AСTB household gene, the expression of the ETV6-NTRKA protein was confirmed by an immunoblot. A comparison of the dose—effect curves of fibroblasts and HFF-EN cells showed a ~38-fold increase in the sensitivity of HFF-EN to larotrectinib. To obtain a cell model of resistance to larotrectinib in NTRK-dependent cancer we use cell passages with a gradually increasing concentration of larotrectinib to develop of resistant clones. p.G623E c.1868G>A mutation was found in five clones, and p.R582W c.1744C>T mutation, previously not described as a resistance mutation, was found in one clone showing significantly less resistance. The obtained data can be further used for a more complete understanding of the mechanisms of TRK inhibitors resistance and for the development of new drugs.