Получение адгезивной культуры нейральных стволовых/прогениторных клеток обонятельной выстилки ¶для терапии травм спинного мозга
О.В.Степанова1,4, А.Д.Воронова1, Г.А.Фурса1,2, Е.К.Карсунцева1,2, М.П.Валихов1,4, А.В.Чадин1, Д.А.Вишневский1, И.В.Решетов3, В.П.Чехонин1 - 202-208
1Отдел фундаментальной и прикладной нейробиологии ¶ФГБУ ФМИЦПН им. В.П.Сербского Минздрава России, Москва; ¶2МГУ им. М.В.Ломоносова, Москва, РФ; ¶3Университетская клиническая больница № 1 Первого МГМУ им. И.М.Сеченова, Москва, РФ; 4Отдел клинической диагностики ФГБУ НМИЦ кардиологии Минздрава России, Москва
Разработан оптимальный протокол получения адгезивной культуры нейральных стволовых/прогениторных клеток (НСПК) обонятельной выстилки крыс. При разработке протокола оценивались условия культивирования клеток на адгезивных матриксах — фибронектине и ламинине — в среде DMEM/F-12 или нейробазальной среде с одинаковыми культуральными добавками. Пролиферация клеток была максимальной при культивировании на ­обоих матриксах в нейробазальной среде. С помощью иммунофлюоресцентного метода было выявлено, что при культивировании на фибронектине в нейробазальной среде содержание нестинпозитивных клеток было максимальным (52.22%) по сравнению с другими условиями культивирования. Наибольшее содержание βIII-тубулинпозитивных клеток было выявлено в культурах, растущих на фибронектине в нейробазальной среде и в DMEM/F-12 (79.11 и 83.52% соответственно). Культивирование адгезивных культур в нейробазальной среде на фибронектине позволяет получить культуру, максимально обогащённую НСПК и дифференцирующимися из них нейронами, в достаточном для дальнейшей трансплантации количестве. Разработанный протокол может быть рекомендован для получения НСПК обонятельной выстилки человека для терапии травм спинного мозга.
Ключевые слова: нейральные стволовые/прогениторные клетки; обонятельная выстилка; обонятельный эпителий; клеточная терапия; травмы спинного мозга
Адрес для корреспонденции: sms-34@yandex.ru Степанова О.В.
DOI: 10.47056/1814-3490-2020-3-202-208
Obtaining of adhesive culture of the neural stem/progenitor cells of the olfactory mucosa for the treatment of spinal cord injuries
O. V. Stepanova1,4, A. D. Voronova1, G. A. Fursa1,2, E. K. Karsuntseva1,2, M. P. Valikhov1,4, A. V. Chadin1, D. A. Vishnevsky1, I. V. Reshetov3, and V. P. Chekhonin1
1Department of Fundamental and Applied Neurobiology, V. P. Serbsky Federal Medical Research Center for Psychiatry and Narcology, Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow, Russia; 2M. V. Lomonosov Moscow State University Moscow, Russia; 3Universitty Clinical Hospital No. 1, I. M. Sechenov First Moscow State Medical University, Ministry of Health of the Russian Federation (Sechenov University), Moscow, Russia; 4Department of Clinical Diagnostics, National Medical Research Centre of Cardiology, Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow, Russia
In this work, an optimal protocol was developed for obtaining an adhesive culture of neural stem /progenitor cells (NSPC) of rat olfactory mucosa. When we evaluated the conditions for culturing cells on fibronectin and laminin adhesive matrices, in DMEM:F-12 and neurobasal media with the same culture additives. Cell proliferation was maximal when cultured on both matrices in a neurobasal medium. Using the immunofluorescence method, it was found that when cultured on fibronectin in a neurobasal medium, the percentage of non-negative cells was maximum (52.22%) compared to other cultivation conditions. The highest percentage of βIII-tubulin-positive cells was detected in cultures growing on fibronectin in a neurobasal medium and in DMEM:F-12 (79.11 and 83.52%, respectively). The cultivation of adhesive cultures in a neurobasal medium on fibronectin makes it possible to obtain a culture that is enriched with NSPCs and neurons differentiating from them in a quantity sufficient for further transplantation. The developed protocol can be recommended for obtaining the NPSC from human olfactory mucosa for the treatment of spinal cord injuries.
Key Words: neural stem/progenitor cells; olfactory mucosa; olfactory epithelium; cell therapy; spinal cord injuries