Запуск апоптоза с помощью химиотерапевтических препаратов является одним из самых эффективных подходов к лечению онкологических заболеваний. Каспазы — основные ферменты апоптоза — проходят процесс активации для инициации гибели. Активация инициаторных каспаз требует их присоединения к специальным белковым комплексам. Для изучения механизмов апоптоза необходимо выделение таких комплексов. Однако их очистка — сложная биохимическая задача, поскольку они образуются в клетке в небольшом количестве и быстро деградируют. Мы разработали эффективный способ выделения комплексов активации каспаз, образующихся в опухолевых клетках при повреждениях ДНК. Способ основан на использовании сочетания гель-фильтрации с иммунопреципитацией. Первый этап направлен на разделение высокомолекулярных комплексов активации каспаз и их мономерных форм, что позволяет увеличить эффективность выделения комплексов на втором этапе.

The initiation of apoptosis with chemotherapeutic drugs is one of the most effective approaches to the treatment of cancer. Caspases, the main enzymes of apoptosis, were activated to initiation of death. Activation of initiator caspases requires their attachment to special protein complexes. To study the mechanisms of apoptosis, it is necessary to isolate such complexes. However, their purification is a complex biochemical task, since they are formed in a cell in a small amount and quickly degrade. We have developed an effective method for isolation of caspase-activating complexes formed in tumor cells during DNA damage. The method is based on the use of a combination of gel filtration with immunoprecipitation. The first stage is aimed at the separation of high molecular weight caspase-activating complexes and their monomeric forms, which allows to increase the efficiency of separation of complexes in the second stage.