Методики
Выделение, очистка и структурно-функциональный анализ рекомбинантного трансферрина человека, продуцируемого штаммом метилотрофных дрожжей Pichia pastoris
Р.Ю.Попов1,2, Е.Д.Никольская3, Т.К.Алиев2,4, Н.Н.Костин2, Т.В.Бобик2, А.Г.Габибов2 - 656-660
1НИЦ "Курчатовский Институт", Москва, РФ; 2Институт биоорганической химии им. академиков М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова Российской академии наук, Москва, РФ; 3Институт биохимической физики им. Н.М.Эмануэля Российской академии наук, Москва, РФ; 4МГУ им. М.В.Ломоносова, Москва, РФ
Получен рекомбинантный модифицированный трансферрин (N413D и N611D), секретируемый штаммом-продуцентом pPIC9pGAPZalpha-short_hTFNG Pichia pastoris (далее — Yst-TFNG2). Предложен многостадийный метод выделения и очистки рекомбинантного трансферрина с выходом целевого продукта 70,29 % и чистотой не менее 95 %. Структурное соответствие рекомбинантного трансферрина природному аналогу подтверждено методами масс-спектрометрии и кругового дихроизма. Функциональный анализ показал способность полученного белка связывать и высвобождать ионы железа, а также поддерживать пролиферацию эукариотических клеток.
Ключевые слова: рекомбинантный трансферрин; Pichia pastoris; очистка белка; структурно-функциональный анализ
Адрес для корреспонденции: poprom@outlook.com Попов Р.Ю.
DOI: 10.47056/0365-9615-2025-179-5-656-660
Isolation, purification, and structural-functional analysis of recombinant human transferrin produced by the methylotrophic yeast strain Pichia pastoris
R. Yu. Popov1,2, E. D. Nikolskaya3, T. K. Aliev2,4, N. N. Kostin2, T. V. Bobik2, and A. G. Gabibov2
1National Research Centre "Kurchatov Institute", Moscow, Russia; 2Shemyakin-Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistry, Russian Academy of Sciences, Moscow, Russia; 3Emanuel Institute of Biochemical Physics, Russian Academy of Sciences, Moscow, Russia; 4Lomonosov Moscow State University, Moscow, Russia
A recombinant modified human transferrin (N413D and N611D) was produced by the Pichia pastoris strain pPIC9pGAPZalpha-short_hTFNG (Yst-TFNG2). A multi-step protocol for isolation and purification of recombinant transferrin was developed, achieving the target protein yeild of 70.29 % and a purity of at least 95 %. Structural correspondence of the recombinant transferrin, compared to its native counterpart, was confirmed via mass spectrometry and circular dichroism analysis. Functional analysis demonstrated the protein's ability to bind and release iron ions, as well as support the proliferation of eukaryotic cells.
Key Words: recombinant transferrin; Pichia pastoris; protein purification; structural-functional analysis