Исследование направлено на поиск молекул-мишеней для микроРНК miR-12 с целью дальнейшего изучения механизма действия длинной некодирующей РНК GAS5 при раке предстательной железы. С помощью количественной ПЦР в реальном времени оценивали экспрессию GPRC5B (рецептор B класса C группы 5, связанный с G-белком) в линиях раковых клеток предстательной железы для анализа влияния ингибирования экспрессии GAS5 или подавления miR-12 на экспрессию GPRC5B. Изменения скорости пролиферации клеток рака предстатель­ной железы и их способности к образованию колоний после ингибирования экспрессии GPRC5B оценивали с помощью CCK8-анализа и клонирования клеток в планшетах. После трансфекции раковых клеток sh-GAS5 и ингибитором miR-12 оценивали изменения экспрессии GPRC5B с помощью количественной ПЦР с обратной транскрипцией и вестерн-блоттинга. Экспрессия GPRC5B была существенно повышена в опухолевых клетках. Ингибирование GAS5 снижало, а подавление miR-12 увеличивало экспрессию GPRC5B. Анализ CCK8 и высевание клеток в планшеты показали, что экспрессия GPRC5B способствует увеличению пролиферативной активности опухолевых клеток и формированию колоний. С помощью ПЦР и вестерн-блоттинга обнаружено, что miR-12 ослабляет усиливающее действие GAS5 на экспрессию GPRC5B. Таким образом, рецептор GPRC5B непосредственно связан с miR-12, причём GAS5 способствует пролиферации, миграции и инвазии раковых клеток предстательной железы, а также участвует в прогрессировании злокачественных опухолей путём увеличения экспрессии GPRC5B благодаря ингибированию miR-12.

The paper is aimed to screen the target molecules of miR-12 and to further explore the mechanism of GAS5 action in prostate cancer. The expression of GPRC5B in prostate cancer cell lines LNCaP, VCaP, 22RV1, DU145, and PC3 was measured by quantitative real-time PCR with reverse transcription and variations in GPRC5B expression were analyzed after down-regulating GAS5 or silencing miR-12. CCK8 and plate clone experiments were performed to detect changes in proliferative activity and colony-forming capacity of prostate cancer cells after down-regulating GPRC5B. After transfection of prostate cancer cells with sh-GAS5 and/or miR-12 inhibitor, the changes in GPRC5B expression were evaluated by real-time quantitative PCR with reverse transcription and Western blotting. Our results showed that GPRC5B was highly expressed in prostate cancer cell lines. Down-regulating of GAS5 decreased GPRC5B expression, while silencing miR-12 increased it. CCK8 and plate clone experiments showed that expression of GPRC5B increased proliferative activity and clone formation ability of prostate cancer cells. RT-qPCR and Western blotting revealed that miR-12 inhibited the promoting effect of GAS5 on GPRC5B expression. Thus, GPRC5B is directly bound to miR-12. GAS5 promotes proliferation, migration, and invasion of prostate cancer cells and participates in malignant progression of tumors by suppressing miR-12-mediated regulation of GPRC5B expression.