Онкология
Апробация методики ex vivo облучения клеток лимфатических узлов мыши
М.Н.Юрова, Е.И.Федорос, А.Б.Данилова, Т.Л.Нехаева, Н.В.Емельянова, А.В.Григорьевская, И.Г.Попович, И.А.Балдуева - 208-213
НМИЦ онкологии им. Н.Н.Петрова Минздрава России, Санкт-Петербург, РФ
В работе представлена апробация протокола получения лимфоидной ткани из лимфатических узлов мыши и характеристика уровня повреждения ДНК с анализом белковых маркеров репарации и апоптоза в модели ex vivo облучения клеток. Суспензию клеток лимфатических узлов подвергали рентгеновскому облучению в дозе 2 Гр. Контролем служили ложнооблученные (0 Гр) клетки. Тест ДНК-комет показал, что через 3 ч после ex vivo облучения в дозе 2 Гр в суспензии клеток лимфатических узлов уровень повреждения ДНК увеличился в 7 раз. Отмечено значимое увеличение уровня белков репарации (γН2АХ — в 3.7 раза, Rad51 — в 2.2 раза, XPA — в 28 раз), белков остановки клеточного цикла (Cdc25A — в 2.6 раза, р21 — в 10 раз, р16 — в 5 раза) и проапоптотического белка Bax (в 3.8 раза) без существенного изменения уровня Bcl-2. Реализация данной методики позволяет быстро получить образцы лимфоидной ткани, пригодные для анализа радиочувствительности лимфоидных клеток мышей разных линий, изменения их чувствительности после или в сочетании с первичным повреждающим воздействием.
Ключевые слова: ex vivo облучение; лимфатический узел; репарация; апоптоз; онкология
Адрес для корреспонденции: yumarni@gmail.com Юрова М.Н.
DOI: 10.47056/0365-9615-2025-179-2-208-213
Ex vivo irradiation protocol in murine lymph node cells
M. N. Yurova, E. I. Fedoros, A. B. Danilova, T. L. Nekhaeva, N. V. Emelyanova, A. V. Grigorevskaya, I. G. Popovich, and I. A. Baldueva
N. N. Petrov National Medical Research Center of Oncology, Ministry of Health of Russian Federation, St. Petersburg, Russia
The aim was to test the protocol for obtaining lymphoid tissue from mouse lymph nodes and characterize the level of DNA damage with repair and apoptosis protein markers analysis in ex vivo model of cell irradiation. The lymph node cell suspension was exposed to X-ray irradiation at a dose of 2 Gy and compared with a sham-irradiated (0 Gy) control. Ex vivo irradiation at a dose of 2 Gy after 3 h caused a 7-fold increase in DNA damage level determined in DNA comet assay. A significant increase in the level of repair proteins (γH2AX — 3.7-fold, Rad51 — 2.2-fold, XPA — 28-fold), cell cycle arrest proteins (Cdc25A — 2.6-fold, p21 — 10-fold, p16 — 5-fold) and pro-apoptotic protein Bax (3.8-fold) was noted, without a significant change in Bcl-2 level. The implementation of this technique allows quickly obtain lymphoid tissue samples suitable for analyzing the radiosensitivity of lymphoid cells in mice of various strains, changes in their sensitivity after or in combination with primary damaging effects.
Key Words: ex vivo irradiation; lymph node; repair; apoptosis; oncology