На животной модели гепатомы человека (инокулирование клеток гепатоцеллюлярной карциномы мышам nude) изучили механизм ингибирующего действия белка семейства серпинов геспинтора на рост опухоли с помощью метода секвенирования длинных некодирующих (днкРНК). Через 2 сут после трансплантации опухолевых клеток мышам 2 раза в неделю в течение 4 нед в хвостовую вену вводили 15 мкг/кг геспинтора или физиологический раствор. В выделенных образцах опухоли определили библиотеки комплементарной ДНК, полученные транскриптомы секвенировали. На основе данных РНК-секвенирования выявляли гены, дифференциально экспрессирующие днкРНК (ДЭГ днкРНК), после чего их анализировали по функциональному обогащению и взаимодействию для выявления наборов регуляторных генов. На следующем этапе применили метод сетевого модульного анализа генов для выделения ключевых генов, ассоциированных с действием геспинтора, а также для построения регуляторной сети и критичес­ких сигнальных путей, связанных с ключевыми генами; результаты проверили с помощью вестерн-блоттинга. Наборы выявленных генов, регулируемых ДЭГ днкРНК, оказались функционально обогащёнными главным образом в отношении регуляции поведения клеток, транскрипции и клеточного цикла. Сигнальный путь PI3K/Akt, связанный с выявленным набором генов, играет ключевую роль в противоопухолевом действии геспинтора, через который этот белок снижает экспрессию регуляторных белков клеточного цикла (циклин D1, P-Rb, CDK4 и CDK6), приводя к остановке клеточного цикла в G1/S-фазе.

The mechanism of Hespintor (a protein of serpin family) inhibitory action on the growth of inoculated hepatocellular carcinoma was studied in a model of human hepatoma in nude mice by using on long-noncoding RNA (lncRNA) sequencing. The tumors were isolated in 4 weeks after subcutaneous injection of human hepatoma cells MHCC97-H. In Hespintor and control groups, the complementary DNA libraries of tumor tissues were established, and transcriptome sequencing was performed. Based on RNA-sequencing data, the differentially expressing lncRNA genes (DEGs lncRNA) were obtained, and functional enrichment and interaction analyses were performed to find the regulatory gene sets. Then, the network module division method was employed to identify the key genes of Hespintor action, as well as to build the regulatory network and critical pathways associated with the key genes with validation of the results by Western blotting. The target gene sets regulated by DEGs lncRNA were mainly enriched in cell behavior, transcriptional regulation, and cell cycle. The PI3K/Akt signaling pathway related to the revealed gene sets plays a leading role in the antitumor action of Hespintor, targeted by this serpin to down-regulate expression levels of the cell cycle regulatory proteins Cyclin D1, P-Rb, CDK4, and CDK6, thereby arresting the cell cycle in hepatocellular carcinoma in G1/S phase.