В работе изучали биологическую роль и механизм действия длинной некодирую­щей РНК (lncRNA) CCAT2 (colon cancer-associated transcript 2) при плоскоклеточном раке гортани (ПРГ) человека. Уровни экспрессии CCAT2 в клинических образцах пациентов с ПРГ и в клетках линии TU-212оценивали с помощью количественной ПЦР в реальном времени. Определяли корреляцию экспрессии CCAT2 с клинико-патологическими особенностями пациентов с ПРГ и прогнозом заболевания. Функциональную роль CCAT2 у пациентов с ПРГ оценивали с помощью набора Cell Counting Kit-8, Transwell-системы, проточной цитометрии, а также опытов in vivo с ксенотрансплантатами ПРГ. Экспрессию потенциальных целевых белков определяли с помощью вестерн-блоттинга и иммуногистохимии. Выявлено, что экспрессия CCAT2 была достоверно повышена в тканях ПРГ и клетках TU-212 (p<0.05). Анализ выживаемости показал, что у пациентов с ПРГ и высокой экспрессией CCAT2 5-летняя выживаемость была достоверно ниже, чем у пациентов с низкой экспрессией (p<0.05). Нокаут CCAT2 с помощью коротких шпилечных РНК (sh-CCAT2) снижал пролиферативный и инвазивный потенциал клеток TU-212 (p<0.05) и способствовал их апоптозу. У мышей Nude нокаут CCAT2 подавлял рост трансплантированной опухоли, уменьшая её объём и массу (p<0.05 по сравнению с контролем). В группе sh-CCAT2 клеток TU-212 уровни экспрессии β-катенина и CDK8 достоверно снизились (p<0.05). Таким образом, нокаут CCAT2 при ПРГ подавляет пролиферацию и инвазию клеток, а также экспрессию сигнального пути Wnt/β-катенина, что указывает на новые терапевтические мишени и прогностические индикаторы у пациентов с ПРГ.

This study aimed to explore the biological role and underlying mechanism of lncRNA colon cancer-associated transcript 2 (CCAT2) in human laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC). CCAT2 expression levels in LSCC clinical samples and TU-212 cell line was evaluated by quantitative real-time PCR. The correlation of CCAT2 expression level with clinicopathological characteristics of patients and their prognosis was analyzed. The functional role of CCAT2 in human LSCC was assessed with Cell Counting Kit-8, Transwell assay, flow cytometric analysis, and LSCC xenograft experiment in vivo. Expression of potential targeted proteins was detected by Western blotting and immunohistochemistry. We found that expression of CCAT2 was significantly elevated in LSCC tissues and TU-212 cells (p<0.05). Survival analysis showed that LSCC patients with high expression of CCAT2 had a shorter 5-year overall survival rate than those with low expression (p<0.05). In addition, CCAT2 silencing with short hairpin RNA (sh-CCAT2) significantly decreased the proliferative and invasive potential of TU-212 cells (p<0.05) and promoted their apoptosis. In Nude mice, CCAT2 knockdown suppressed the growth of tumor and decreased its volume and weight in comparison with the controls (p<0.05). In sh-CCAT2 group of TU-212 cells, expression of β-catenin and CDK8 was also significantly down-regulated (p<0.05). Thus, knockdown of CCAT2 suppressed proliferation and invasion of the cells and inhibits Wnt/β-catenin signaling pathway in LSCC, which indicates the novel therapeutic targets and prognostic indicators in patients with LSCC.