В работе исследовали механизмы действия сигнального белка клаудина-6 (CLDN6) на миграцию и инвазию клеток РМЖ линий MCF-7 и SKBR-3. Для этого подав­ляли сигнальные белки SMAD с помощью их ингибитора SB431542, короткими шпилечными РНК нокаутировали гены CLDN6 и Snail, MMP-2 и MMP-9 ингибировали с помощью TIMP-1. Уровни экспрессии MMP2 и MMP9 мРНК определяли с помощью ПЦР с обратной транскрипцией, экспрессию соответствующих белков, а также E-кадгерина, N-кадгерина и виментина — с помощью вестерн-блоттинга. Миграцию раковых клеток анализировали с помощью scratch-теста, клеточную инвазию — с помощью Transwell-системы с Matrigel. SB431542 угнетал экспрессию MMP2 и MMP9 в обеих линиях клеток. Однократное применение SB431542 подавляло экспрессию MMP-2 и MMP-9 и соответствующих мРНК, однако последующий нокаут гена CLDN6 устранял этот эффект. TIMP-1 отменял ингибирование экспрессии E-кадгерина, увеличение экспрессии N-кадгерина и виментина, а также усиление миграции и инвазии, вызванное нокаутом CLDN6. Нокаут гена SNAIL снизил миграцию и инвазию клеток и увеличил экспрессию E-кадгерина, при этом экспрессия MMP2, MMP9, N-кадгерина и виментина снизилась. Таким образом, CLDN6 подавляет эпителиально-мезенхимальный переход, а также миграцию и инвазию клеток РМЖ линий MCF-7 и SKBR-3 путём блокирования сигнальной оси SMADs/Snail/MMP-2/9.

The study examined the mechanisms of action of signal protein claudin6 on migration and invasion of breast cancer cell lines MCF-7 and SKBR-3. To this end, the signal proteins SMADs were blocked with their inhibitor SB431542, the genes CLDN6 and SNAIL were knocked down with short hairpin RNA, and MMP-2 and MMP-9 were inhibited with TIMP-1. Expressions of MMP-2, MMP-9, E-cadherin, N-cadherin, and vimentin were examined by Western blotting. Migration and invasion were analyzed by scratch test and Matrigel invasion assay. SB431542 inhibited expression of MMP-2 and MMP-9 in both cell lines. Single use of SB431542 inhibited expression of MMP-2/MMP-9 and corresponding mRNAs, but subsequent silencing of CLDN6 gene reversed this effect. TIMP-1 reversed down-regulation of E-cadherin, up-regulation of N-cadherin and vimentin, facilitation of migration and invasion evoked by knocking down of CLDN6. Silencing of SNAIL gene inhibited migration and invasion, up-regulated expression of E-cadherin, and down-regulated expression of MMP-2, MMP-9, N-cadherin, and vimentin. Thus, CLDN6 suppresses epithelial—mesenchymal transition, migration, and invasion via blocking SMADs/Snail/MMP-2/9 signaling pathway in MCF-7 and SKBR-3 cancer cell lines.