Фармакология и токсикология
Удаление примесной дцРНК из препарата синтезированной матричным синтезом мРНК
С.В.Шарабрин1, А.А.Бондарь2, E.B.Старостина1, Д.Н.Кисаков1, Л.А.Кисакова1, А.М.Задорожный1, А.П.Рудометов1, А.А.Ильичев1, Л.И.Карпенко1 - 723-728
1ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора, р.п. Кольцово, Новосибирская обл., РФ; 2ФГБУН Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск, РФ
Одна из технологических проблем, которую необходимо решить в процессе синтеза мРНК in vitro, — это удаление примесей двуцепочечной РНК (дцРНК), которые, по-видимому, являются результатом побочной активности РНК-полимеразы Т7. Для удаления данных примесей использовали модифицированный метод очистки, основанный на селективном связывании дцРНК с целлюлозой в этанолсодержащем буфере. Показано in vitro и in vivo, что очищенный на целлюлозе препарат мРНК не вызывает активации воспалительного маркера лимфоцитов CD69, не индуцирует повышенный выброс IFNα у мышей и не содержит примесей, выявляемых антителами к дцРНК.
Ключевые слова: мРНК; дцРНК; очистка мРНК
Адрес для корреспонденции: sharabrin.sv@gmail.com Шарабрин С.В.
DOI: 10.47056/0365-9615-2023-176-12-723-728
Removal of dsRNA contaminants from the preparation of mRNA synthesized by matrix synthesis
S. V. Sharabrin1, A. A. Bondar2, E. V. Starostina1, D. N. Kisakov1, L. A. Kisakova1, A. M. Zadorozhny1, A. P. Rudometov1, A. A. Ilyichev1, and L. I. Karpenko1
1State Research Center of Virology and Biotechnology "VECTOR", Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing, Koltsovo, Novosibirsk region, Russia; 2Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine, Siberian Division of the Russian Academy of Sciences, Novosibirsk, Russia
One of the technological problems to be solved in the process of mRNA synthesis in vitro is the removal of double-stranded RNA (dsRNA) contaminants, which apparently result from the side activity of RNA polymerase T7. A modified purification method based on the selective binding of dsRNA to cellulose in ethanol-containing buffer was used to remove these contaminants. It was shown in vivo and in vitro that the cellulose-purified mRNA preparation does not induce activation of the lymphocyte inflammatory marker CD69, does not induce increased IFNα release in mice and does not contain contaminants detectable by antibodies to dsRNA.
Key Words: mRNA; dsRNA; mRNA purification