Изучена роль фактора активации B-клеток (BAFF) в PI3K/AKT/mTOR-сигнальном пути в усилении пролиферации и поддержании выживаемости регуляторных B-лимфоцитов (Breg-клеток) у новорождённых с сепсисом. Образцы периферической крови брали у недоношенных новорождённых с сепсисом (n=40) в день постановки диагноза и на 7, 14 и 21-й день после, а также у детей контрольной группы (недоношенные новорождённые без сепсиса; n=40). Из образцов крови выделяли мононуклеарные клетки и B-клетки, которые культивировали и стимулировали с помощью ЛПС и иммуноадъюванта CpG-олигодезоксинуклеотида (CpG-ОДН). Пролиферацию и дифференцировку B-клеток в CD19⁺CD24^hiCD38^hi Breg-клетки и связь этих процессов с PI3K/AKT/mTOR-сигнальным путём изучали методами проточной цитометрии, количественной ПЦР в реальном времени с обратной транскрипцией и вестерн-блоттинга. Выявлено, что у септических новорождённых в образцах периферической крови уровень BAFF был достоверно повышен через 1 нед после постановки диагноза и обнаружена тенденция к увеличению экспресии рецепторов BAFF. BAFF ускорял дифференцировку B-клеток в CD19⁺CD24^hiCD38^hi Breg-клетки при совместном действии ЛПС+CpG-ОДН. Процессы фосфорилирования фактора 4E-BP1 и киназы 70S6K сигнального пути PI3K/AKT/mTOR достоверно усиливались при стимулирующем действии BAFF совместно с ЛПС и CpG-ОДН. Повышенный уровень BAFF активирует PI3K/AKT/mTOR-сигнальный путь и индуцирует дифференцировку B-клеток периферической крови в CD19⁺CD24^hiCD38^hi Breg-клетки in vitro.

In this study, we investigated the role of B cell-activating factor (BAFF) in PI3K/AKT/mTOR signaling pathway in promoting proliferation and maintaining survival of regulatory B lymphocytes (Breg). The peripheral blood samples were collected from preterm neonates (n=40) diagnosed with sepsis on the day of diagnosis and on the days 7, 14, and 21 after diagnosis, as well as from the matched preterm neonates without sepsis (n=40; control group). The peripheral blood mononuclear cells and B cells were isolated, cultured, and stimulated with LPS and immunostimulant CpG-oligodeoxynucleotide (CpG-ODN). Proliferation and differentiation of B-cells into CD19⁺CD24^hiCD38^hi Breg cells and their relationship to PI3K/AKT/mTOR signaling pathway were investigated with flow cytometry, real-time quantitative reverse transcription PCR (qRT-PCR), and Western blotting. BAFF levels in the peripheral blood of neonates with sepsis were significantly increased at one week after diagnosis in parallel with a rising trend of BAFF-R expression. When applied with LPS and CpG-ODN, BAFF up-regulated differentiation of B cells into CD19⁺CD24^hiCD38^hi Breg cells. Phosphorylation of 4E-BP1 factor and 70S6K kinase located downstream in PI3K/AKT/mTOR signaling pathway was significantly up-regulated when stimulated with BAFF in company with LPS and CpG-ODN. Thus, elevated BAFF activates PI3K/AKT/mTOR signaling pathway and induces in vitro differentiation of peripheral blood B cells into CD19⁺CD24^hiCD38^hi Breg cells.