Получена рекомбинантная форма белка пневмолизина Streptococcus pneumoniae. С помощью программы для биоинформационного анализа Vector NTI Advance ver. 11.0 были сконструированы праймеры для проведения ПЦР с целью дальнейшего клонирования фрагмента генома штамма № 3358 S. pneumoniae серотипа 19F, содержащего нуклеотидную последовательность, кодирующую полноразмерный белок пневмолизин. Получен ПЦР-продукт с молекулярной массой, соответствующей нуклеотидной последовательности фрагмента генома S. pneumoniae, кодирующего полноразмерный белок пневмолизин. Была сконструирована система для экспрессии рекомбинантного белка пневмолизина в бактериальной культуре E. coli. Идентичность встроенной нуклеотидной последовательности, кодирующей полноразмерный рекомбинантный белок пневмолизин, синтезируемый в штамме М15 E.coli, была подтверждена секвенированием. Очистку рекомбинантного белка проводили методом аффинной хроматографии с использованием Ni-сефарозы в 8 M буферном растворе мочевины. Подтверждение рекомбинантного белка проводили с помощью моноклональных антител к пневмолизину в иммуноблоттинге.

The aim of this work was to obtain a recombinant form of pneumolysin from Streptococcus pneumoniae. By using bioinformatic analysis software Vector NTI Advance vers. 11.0 specific primers were designed in order to amplify the genome fragment of strain N. 3358 S. pneumoniae serotype 19F containing the nucleotide sequence encoding the full-length pneumolysin protein. A PCR product with a molecular weight corresponding to the nucleotide sequence of the S. pneumoniae genome fragment encoding the full-length pneumolysin was obtained. Construction for recombinant pneumolysin expression in the E. coli pQE system was made. The identity of the inserted nucleotide sequence encoding the full-length recombinant pneumolysin synthesized in M15 E. coli strain was confirmed by sequencing. As a result, a recombinant pneumolysin protein was obtained. Purification of the recombinant protein was performed by affinity chromatography using Ni-sepharose in 8 M urea buffer solution. Confirmation of the recombinant protein was performed using monoclonal antibodies to pneumolysin by immunoblotting.