Проведено изучение действия экстракта сигаретного дыма (ЭСД) и ЛПС, а также их комбинации на активность и пироптоз эндотелиальных клеток микрососудов лёгких (ЭКМЛ). Клетки культивировали без исследуемых агентов (контроль), в присутствии ЭСД (1-25%), 20 нг/мл ЛПС или 20% ЭСД+20 нг/мл ЛПС. Жизнеспособность ЭКМЛ определяли с помощью набора CCK-8, апоптоз — проточной цитометрией, морфологию ЭКМЛ анализировали под световым микроскопом. Содержание ИЛ-1β и ИЛ-18 измеряли с помощью ИФА. ЭСД дозозависимо снизил выживаемость клеток. В группе ЭСД+ЛПС цитоморфологические альтерации были особо выражены, а интенсивность пироптоза была наибольшей. Проточная цитометрия выявила усиление апоптоза в группах ЭСД и ЛПС по сравнению с контролем, а в группе ЭСД+ЛПС скорость апоптоза была ещё выше (p<0.01). В опытных группах уровни ИЛ-1β и ИЛ-18 в супернатантах клеточных суспензий были достоверно (p<0.01) выше, чем в контроле, однако достоверных различий между группами ЭСД и ЛПС не выявлено. В группе ЭСД+ЛПС уровни ИЛ-1β и ИЛ-18 были выше, чем в остальных группах (p<0.01). Таким образом, мы показали, что влияние ЭСД на жизнеспособность клеток было дозозависимым. Сов­местное применение ЭСД и ЛПС индуцирует пироптоз и повышает содержание провоспалительных цитокинов в ЭКМЛ. Следовательно, пироптоз, вызываемый ЭСД и ЛПС, может играть важную роль в ремоделировании лёгочных сосудов.

In this work, we investigate the effect of cigarette smoke extract (CSE) and LPS or their combination on the activity and pyroptosis of pulmonary microvascular endothelial cells (PMVEC) of rats. PMVEC were cultured without treatment, with CSE in different concentrations (1-25%), 20 ng/ml LPS, or 20% CSE+20 ng/ml LPS. Cell viability was detected using the CCK8 kit, apoptosis was evaluated by flow cytometry, and cell morphology was evaluated using optical microscopy. The content of IL-1β and IL-18 was measured by ELISA. CSE decreased cell viability in a dose-dependent manner. The morphology of cells in the CSE+LPS group showed the most significant cytomorphological changes and the highest pyroptosis rate. Flow cytometry showed that the CSE and LPS groups had higher apoptosis rates than the control group; but the highest apoptotic rate was revealed in the CSE+LPS group (p<0.01). Compared with the control, the levels of IL-18 and IL-1β in the cell supernatant of the CSE, LPS, and CSE+LPS groups were significantly (p<0.01) increased. There were no differences between the CSE and LPS groups. Compared with the CSE and LPS groups, the CSE+LPS group had higher levels of IL-18 and IL-1β (p<0.01). Thus, our study revealed that the effect of CSE on cell viability is dose-dependent. CSE+LPS can induce cell pyroptosis and increase the levels of inflammatory cytokines in PMVEC. These observations demonstrated that pyroptosis caused by CSE and LPS might play an important role in pulmonary vascular remodeling.