В данном исследовании мы оценивали противоопухолевую активность фангхинолина (ФАН) в отношении клеток культур колоректального рака человека линий CCL-244 и SW480 и изучили механизм действия этого препарата. Жизнеспособность и апоптоз клеток оценивали с помощью МТТ-теста и путём окрашивания аннексином V-PI. Активность каспазы-3 определяли с помощью вестерн-блоттинга. Для определения экспрессии маркерных белков стресса эндоплазматического ретикулума использовали количественную ПЦР в реальном времени, вестерн-блоттинг и генетическую трансфекцию. Выявлено, что ФАН дозозависимо подавлял рост культивируемых клеток CCL-244 и SW480 и вызывал их апоптоз, причём предварительное подавление каспазы-3 с помощью ингибитора Ac-DEVD-CHO снизило этот эффект ФАН. Кроме того, ФАН усилил экспрессию маркерных белков стресса эндоплазматического ретикулума p-PERK, p-eIF2α, ATF4 и CHOP в исследованных клетках. Нокаут гена CHOP или применение 4-фенилмасляной кислоты (ингибитор стресса эндоплазматического ретикулума) препятствовало развитию ФАН-индуцированного апоптоза. Таким образом, ФАН индуцирует апоптоз клеток колоректального рака человека линий CCL-244 и SW4 путём активации стресса эндоплазматического ретикулума.

In this study, we evaluate the anti-tumor effect of fangchinoline (FAN) against human colorectal cancer cell lines CCL-244 and SW480 to reveal the mechanism of FAN action. The cell viability and apoptosis activities were assessed by MTT detection and Annexin V-PI staining, and caspase-3 activity — by Western blotting. The expression of endoplasmic reticulum stress-related proteins we used real-time PCR, Western blotting, and gene transfection. The obtained data showed that FAN inhibited cell growth and induced apoptosis in human colorectal cancer cell lines CCL-244 and SW480 in a dosage-dependent manner. The caspase-3 inhibitor Ac-DEVD-CHO could reverse the inhibitory effect of FAN. Moreover, FAN significantly increased the expression of endoplasmic reticulum stress-related proteins p-PERK, p-eIF2α, ATF4, and CHOP in CCL-244 and SW480 cells. In addition, an endoplasmic reticulum stress inhibitor 4-phenylbutyric acid or CHOP knockdown could prevent FAN-induced apoptosis. Thus, FAN-induced apoptosis of human colorectal cancer was through the activation of endoplasmic reticulum stress.