Методики
Методика понижения аутофлюоресценции ткани фетального мозга человека и количественная оценка эффекта фотовыцветания
Усовершенствована методика понижения фоновой аутофлюоресценции препаратов, изготовленных из фиксированных в формалине и залитых в парафин блоков мозга плодов человека II триместра гестации. Для ослабления избыточной флюоресценции препараты подвергали фотовыцветанию в установке оригинальной конструкции под светодиодной лампой с пиками мощности излучаемого света в синей и красной частях спектра. Эффективность ослабления аутофлюоресценции проверяли по интенсивности испускаемой флюоресценции фона препаратов и относительной численности иммунопозитивных структур после иммуногистохимического окрашивания. Установлено, что использованный метод достоверно ослабляет фоновую флюоресценцию препаратов, способствует получению качественных многоцветных иммунофлюоресцентных изображений коры полушарий мозга.
e.krasnozchekova@spbu.ru Краснощекова Е.И.
10.47056/0365-9615-2021-171-1-122-128
Method of reduction background fluorescence in human fetal brain tissue and quantitative estimate of the effect of photobleaching.
We developed the method of reducing the background fluorescence of samples made from formalin-fixed and paraffin-embedded blocks of human fetal brain in the second trimester of gestation. Reduction of excess background fluorescence was carried out in a construction of an original design using an LED lamp with blue and red emission peaks in range of the visible spectrum. The control of the level of decrease in the background autofluorescence was checked by measuring the intensity of the emitted fluorescence of the background of the samples. In addition, we quantitatively measured the relative abundance of immunopositive structures after immunohistochemical staining for control and experimental samples. It has been found that the proposed method reliably reduces the background fluorescence of the samples, which improves the quality of multicolor immunofluorescence images of the cerebral cortex.