Биофизика и биохимия
Дифференциальная диагностика активного прогрессирующего рассеянного склероза с использованием флюоресцентного биомаркера с резонансным переносом энергии
Ранее мы показали, что миелинреактивные аутоантитела у пациентов с рассеянным склерозом и у мышей с экспериментальным аутоиммунным энцефаломиелитом проявляют способность распознавать и гидролизовать различные фрагменты основного белка миелина (ОБМ). Кроме того, опосредованное антителом расщепление энцефалитогенного фрагмента ОБМ81-103, фланкированного двумя флюоресцентными белками, может служить в качестве нового биомаркера рассеянного склероза. В данной работе описано создание следующего поколения этого биомаркера на основе антителозависимой деградации нового химически синтезированного флюоресцентного субстрата с резонансным переносом энергии, содержащего флюорофор Cy5 и тушитель QXL680, разделенные пептидом ОБМ81-99: Cy5-ОБМ81-99-QXL680. Этот субстрат подвергается деградации при инкубации с очищенными антителами и с В-клетками пациентов с рассеянным склерозом, но не здоровых доноров.
belogurov@mx.ibch.ru Белогуров А.А.
Differential diagnostics of active progressing multiple sclerosis using a fluorescent biomarker with resonance energy transfer
Previous data showed that myelin-reactive autoantibodies found in patients with multiple sclerosis and mice with experimental autoimmune encephalomyelitis recognize and hydrolyze various fragments of myelin basic protein (MBP). Moreover, antibody-mediated cleavage of the encephalithogenic fragment MBP81-103 flanked with two fluorescent proteins can serve as a new biomarker of multiple sclerosis. Here we describe creation of the next generation of this biomarker based on antibody-dependent degradation of a new chemically synthesized fluorescent substrate with resonance energy transfer that contains fluorophore Cy5 and quencher QXL680 separated by MBP81-99 protein (Cy5-MBP81-99-QXL680). This substrate is degraded during incubation with purified antibodies and B cells from patients with multiple sclerosis, but not healthy volunteers.