Иммунология и микробиология
Особенности культивирования и хранения бактерий рода campylobacter в условиях in vitro
Предложена экспериментальная модель оценки in vitro кинетики роста, ингибирования или инактивации бактерий рода Campylobacter, позволяющая количественно определять чувствительность к различным видам стрессовых воздействий, а также выявлять закономерности их перехода в некультивируемые формы. Модель предусматривает использование 96-луночных планшетов для параллельного культивирования нескольких субпопуляций тестируемого штамма при варьировании внутренних параметров среды. Предложенный алгоритм включает определение соотношения числа жизнеспособных КОЕ и общего количества планктонных и некультивируемых клеток в популяции, которое рассчитывают по содержанию геномной ДНК в пробах методом количественной ПЦР (или ПЦР-РВ) с праймерами ciaB, cdtB или 16S рРНК. Наличие матрикса биопленки определяют по интенсивности окрашивания полистироловых пластин раствором красителя. Данная модель позволяет оценивать наиболее значимые воздействия, способствующие формированию устойчивых вариантов микроорганизмов, включая обработку малыми дозами антимикробных веществ. С помощью разработанной модели изучено влияние условий культивирования на свойства популяций Campylobacter jejuni. Наиболее характерной особенностью C. jejuni являлось снижение числа жизнеспособных клеток вплоть до полного исчезновения культивируемых форм при благоприятных ростовых режимах. В среднем после 48 ч инкубации число жизнеспособных клеток в популяции снижалось в 10 раз и более. Этим свойством обладали не все штаммы, некоторые сохраняли жизнеспособность, что удавалось выявить культуральным методом, и участвовали в формировании биопленок.
karlikanova@ion.ru Ефимочкина Н.Р.