Методики
Модификация методики получения инсерционных мутантов с помощью системы EZ::TN5
Показана возможность использования модифицированной методики получения инсерционных мутантов с помощью системы EZ::TN5 при культивировании реципиентного штамма на плотной питательной среде и исключении этапа центрифугирования. Частота образования транспозонных вариантов E. сoli 10979/EZ::TN5 составила 2´10—6. Генетически измененные штаммы характеризовались устойчивостью к канамицину, отсутствием способности к ассимиляции L-малата, изменениями в экспрессии отдельных протеинов белковых масс-спектров (5096.3, 6252.9 и 9067.7 Д) и наличием фрагментов в геномной ДНК, амплифицированных с помощью специфичных прямых и обратных праймеров, гомологичных сайтам посадки транспозона Tn5. Модифицированная методика получения инсерционных мутантов с помощью системы EZ::TN5 не уступает по эффективности таковой при соблюдении стандартных условий, сокращает время эксперимента и упрощает его, а также позволяет снизить риск при работе с микроорганизмами II группы патогенности.
elenakalinki@yandex.ru Молчанова Е.В.