Биотехнологии
Индукция альтернативного сплайсинга и ингибирование активности каталитической субъединицы теломеразы в Т, В и NK клетках человека апоптотической эндонуклеазой EndoG
Д.Д.Жданов, Ю.А.Гладилина, М.В.Покровская, С.С.Александрова, Д.В.Гришин, О.В.Подобед, Н.Н.Соколов - 479-483
Лаборатория медицинской биотехнологии (зав. — докт. биол. наук проф. Н.Н.Соколов) ФГБНУ Научно-исследовательского института биомедицинской химии им. В.Н.Ореховича, Москва, РФ
Исследовали влияние апоптотической эндонуклеазы EndoG на альтернативный сплайсинг мРНК каталитической субъединицы теломеразы hTERT (human Telomerase Reverse Transcriptase) и активность теломеразы в нормальных лимфоцитах человека. CD4+, CD8+, В и NK клетки человека трансфицировали плазмидой, содержащей ген EndoG (pEndoG-GFP), или контрольной плазмидой pGFP. Уровень мРНК EndoG и сплайс-вариантов hTERT проводили методом ОТ-ПЦР в реальном времени. Содержание белка оценивали с помощью вестерн-блоттинга. Активность теломеразы определяли по протоколу амплификации теломерных повторов. Сверхэкспрессия EndoG в клетках вызывала снижение экспрессии полноразмерного активного варианта hTERT и увеличение экспрессии неактивного сплайс-варианта. Нарушение пропорции сплайс-вариантов hTERT в клетках приводило к значительному снижению теломеразной активности уже через 72 ч после трансфекции.
Ключевые слова: лимфоциты человека, EndoG, теломераза, hTERT, альтернативный сплайсин
Адрес для корреспонденции: zhdanovdd@mail.ru Жданов Д.Д.