Транспортёр органических катионов 2 (OCT2, ген SLC22A2) играет важную роль в транспорте эндогенных и экзогенных веществ, в том числе и лекарственных средств, в эпителиальные клетки проксимальных почечных канальцев. Создана рекомбинантная клеточная линия HEK293-OCT2, экспрессирующая транспортёр и флюоресцентный белок EGFP. Клетки HEK293 трансфицировали плазмидной конструкцией pEGFP-T2A-SLC22A2, обеспечивающей коэкспрессию целевого транспортёра и флюоресцентного белка EGFP. Стабильные клоны отбирали с помощью антибиотика G-418 и метода предельных разведений. Экспрессия SLC22A2 подтверждена ПЦР-РВ, образование белка — методом вестерн-блоттинга. Функциональную активность OCT2 анализировали в транспортных экспериментах с субстратом белка-транспортёра амантадином (концентрация оценивалась методом ВЭЖХ-МС/МС). Продемонстрирована насыщаемая кинетика (Km = 14,91 мкМ, Vmax = 0,06 нг/мл/мин) и чувствительность к ингибированию хинидином (100 мкМ). Созданная клеточная линия может быть использована для изучения молекулярных механизмов регуляции активности OCT2, а также для скрининга новых лекарственных соединений на предмет принадлежности к субстратам и/или ингибиторам транспортёра.

Organic cation transporter 2 (OCT2, encoded by the SLC22A2 gene) plays an important role in the transport of endogenous and exogenous substances, including drugs, into epithelial cells of the proximal renal tubules. In the present study, a recombinant HEK293-OCT2 cell line co-expressing the transporter and enhanced green fluorescent protein (EGFP) was generated. HEK293 cells were transfected with the plasmid construct pEGFP-T2A-SLC22A2, which provides the co-expression of the target transporter and EGFP. Stable clones were selected using the G-418 antibiotic and the limiting dilution method. SLC22A2 expression was confirmed by the real-time PCR, and protein expression was confirmed by Western blotting. The functional activity of OCT2 was analyzed in transport experiments using amantadine as the transporter substrate (concentrations were determined by HPLC-MS/MS). Saturable kinetics (Km = 14.91 µM, Vmax = 0.06 ng/mL/min) and sensitivity to inhibition by 100 µM quinidine were demonstrated. The generated cell line can be used to study the molecular mechanisms regulating OCT2 activity, as well as to screen new drug compounds to determine whether they act as substrates and/or inhibitors of the transporter.