Получена генно-инженерная конструкция pQE-phoE, кодирующая нуклеотидную последовательность гена фосфопорина E наружной мембраны (PhoE) Klebsiella pneumoniae. Рестрикционный анализ подтвердил содержание в плазмиде гена phoE (~1000 п.о.). Полноразмерная рекомбинантная форма PhoE синтезирована в клетках E. coli M15 и очищена с помощью никель-агарозы. Подлинность и специфичность полученного рекомбинантного белка соответствовала PhoE K. pneumoniae. Образование PhoE-специфических IgG-антител начиналось после 2-й иммунизации мышей рекомбинантным белком PhoE, адсорбированным на геле гидроксида алюминия. PhoE без адъюванта не индуцировал образования IgG-антител. Различий в титре антител на 7-е и 14-е сутки не выявлено. Оптимальная разовая иммунизирующая доза рекомбинантного белка, вызывающая образование антител у всех опытных мышей, составляла 50 мкг PhoE, адсорбированного на 500 мкг гидроксида алюминия.

A recombinant plasmid pQE-phoE harboring the outer membrane phosphoporin E gene (PhoE) of Klebsiella pneumoniae was engineered. Restriction analysis confirmed the presence of the phoE gene in the plasmid (~ 1000 bp). The full-length recombinant form of PhoE was expressed in Escherichia coli M15 cells and purified via nickel-affinity chromatography. The identity and specificity of the resulting recombinant protein were confirmed to match native K. pneumoniae PhoE. The production of PhoE-specific IgG antibodies began after the second immunization of mice with recombinant PhoE protein adsorbed on aluminum hydroxide gel. PhoE without an adjuvant failed to elicit an IgG antibody response. No differences in antibody titers were detected between days 7 and 14. The optimal single immunizing dose of the recombinant protein, which causes the formation of antibodies in all experimental mice, was 50 µg of PhoE adsorbed on 500 µg of aluminum hydroxide.